本文件規(guī)定了核酸靶序列定量方法的性能評估和質(zhì)量保證的通用要求。本文件適用于數(shù)字PCR(dPCR)或?qū)崟r定量PCR(qPCR)擴增技術對DNA(脫氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)靶序列的定量測定。適用的靶序列核酸分子，包括雙鏈DNA(dsDNA)，如基因組DNA(gDNA)和質(zhì)粒DNA；單鏈DNA(ssDNA)，互補DNA(cDNA)，單鏈RNA(ssRNA)包括核糖體RNA(rRNA)、信使RNA(mRNA)；雙鏈RNA，包括長鏈和短鏈非編碼RNA［微小RNA(miRNA)和小干擾RNA(siRNA)等］。本文件適用于生物來源的核酸(如病毒、原核細胞和真核細胞)、無細胞生物液體樣本(如血漿或細胞基質(zhì))；體外非生物來源的核酸［如寡核苷酸、合成的基因片段和體外轉(zhuǎn)錄(IVT)的RNA］中提取的核酸。本文件不適用于過短的DNA寡核苷酸(＜50堿基)的定量。本文件包含：--分析設計，包括定量策略(qPCR標準曲線法、dPCR分子計數(shù)法、qPCR相對定量法、dPCR比值定量法)和使用控制；--總核酸質(zhì)量濃度定量和核酸樣本質(zhì)量控制，包括核酸質(zhì)量的評估(純度和完整性)；--PCR試驗設計、優(yōu)化，生物信息學和體外特異性測試；--數(shù)據(jù)質(zhì)量控制和分析，包括驗收標準、閾值設置以及歸一化方法；--根據(jù)qPCR/dPCR具體要求的方法驗證(精密度、線性、定量限、檢出限、正確度和穩(wěn)健性)；--計量溯源性建立和測量不確定度評估的方法。本文件不對生物材料的抽樣或生物樣本的處理過程(如采集、保存、運輸、儲存、處理和核酸提取)提出要求或驗收標準。也不對特殊應用(如可能出現(xiàn)特殊基質(zhì)問題的食品或者臨床應用領域)提出要求和驗收標準。