一、檢驗職業(yè)感染的現(xiàn)狀

經(jīng)血、呼吸道、粘膜傳播疾病直接危害著檢驗工作者身體健康。我國是HBV感染的高發(fā)區(qū),約有1.3億人攜帶HBV,HBV表面抗原(HBsAg)的攜帶率為8%-20%;自90年代以來HCV感染也呈上升趨勢,其感染率為3%。目前艾滋病感染在我國的流行已進(jìn)入增長期。在無償獻(xiàn)血人群中檢出乙型肝炎、丙型肝炎、梅毒、艾滋病等病毒感染占有一定的比例。經(jīng)調(diào)查顯示,針頭和玻璃碎片是主要銳器致傷因子,經(jīng)常接觸針頭者發(fā)生銳器傷的危險是不經(jīng)常接觸者的23倍。多種傳染病是通過血液傳染的,而血液檢驗中的職業(yè)暴露大多數(shù)來自實驗室工作人員在實驗操作和標(biāo)本采集過程中,意外被帶病原體的血液污染破損的皮膚或被病原體感染的針頭、血常規(guī)采血針、采血玻璃管、吸頭等銳器刺破皮膚，呼吸道吸入氣溶膠也是傳播方式之一。因此,檢驗人員面臨著嚴(yán)峻的職業(yè)暴露危險。

1.傳播途徑

檢驗人員感染疾病的一般傳染途徑有:

（1）皮膚破損:帶有HIV、HBV、HCV、梅毒等病原體的血液,長時間接觸小傷口、潰瘍、擦傷等破損皮膚,將會造成機體的感染。

（2）穿刺:由于針頭、刀片等對皮膚的意外損傷,使帶有病毒的全血、血清或血漿進(jìn)入皮下或循環(huán)系統(tǒng),造成感染。這種針頭意外損傷是職業(yè)性HBV和HIV感染最重要的原因。帶有HIV的針頭意外穿刺皮膚后,HIV感染的可能性在0--0.9%之間,平均為0.4%。而對于HBV,這個可能性在6%-30%之間,平均為18%。有學(xué)者進(jìn)行了相應(yīng)的統(tǒng)計推算,每1000個艾滋病病人,每年會產(chǎn)生1例由于針頭意外造成的職業(yè)性HIV感染;而每1000個乙肝患者,每年會產(chǎn)生45例類似職業(yè)性HBV感染。由于HBV在人群中的感染率比HIV高得多,在一定人群中,每年產(chǎn)生的因針頭意外造成的職業(yè)性HBV感染比HIV多得多。

（3）粘膜:由于試管未封閉、離心意外等造成的血液飛濺,帶有病原體的血液與口腔、鼻腔黏膜或眼結(jié)膜等接觸,可以造成感染。還有被HIV、HBV、HCV、梅毒等病原體污染的電話、儀器、工作臺面等接觸,也可以造成感染。

（4）吸入含病原體的氣溶膠引起感染:在采血窗口或發(fā)放化驗單時,直接與病人面對面接觸交談,易感染呼吸道疾病。此外,能引起氣溶膠的操作或事故有離心、溢出或濺灑、混合、混旋、研磨、超聲以及開瓶時兩個界面的分離等。

2.危害因素

（1）血源性危害:調(diào)查研究發(fā)現(xiàn),檢驗人員被針刺傷占第2位。最常見危害較大的職業(yè)傳染病有以下3種：

1）乙型肝炎: HBV是檢驗人員面臨傳播危險性最大的血源性疾病,HBV在血液中的濃度可以高達(dá)108-109拷貝/ml,檢驗人員感染率較高。HBV主要傳播途徑是經(jīng)血液的傳播,病毒攜帶者血液中HBV的濃度很高,針刺傷時,只需0.004ml，帶有HBV的血液足以使受傷者感染HBV。

2）丙型肝炎:丙肝病毒(HCV)在血液中的濃度在102-103/ml左右,主要經(jīng)血液傳播,因此通過注射、針刺、含HCV血液污染的傷口和其他密切接觸傳播。丙型肝炎大多數(shù)患者的癥狀不明顯,往往不容易被發(fā)現(xiàn),可表現(xiàn)為流感樣癥狀,有時會造成比HBV更嚴(yán)重的后果。

3）艾滋病(AIDS):近年來我國AIDS的流行對檢驗人員造成了日益嚴(yán)峻的職業(yè)性感染威脅。HIV在血液中的濃度通常在100-104拷貝/ml,被HIV污染的銳器刺傷而感染的比率為0.3%。美國疾病控制中心最新資料顯示,截止到2000年底美國醫(yī)護(hù)人員中已有57人被確診感染了HIV,其中實驗室技術(shù)人員19人。

（2）呼吸道、接觸及節(jié)肢動物叮咬危害因素

病原微生物感染：病原微生物實驗室、特別是高致病性病原微生物實驗室內(nèi)操作的任何疏忽、失誤都可能造成難以彌補的損失。常見感染：結(jié)核分枝桿菌、腸道致病菌等。

3.防護(hù)措施

（1）增強檢驗工作人員的防護(hù)意識及防護(hù)行為：為了最大限度地減少危害,檢驗工作人員應(yīng)主動地從多方面了解關(guān)于HBV、HCV、HIV等相關(guān)的知識,了解各種病毒的傳播方式,使自己知道采取什么樣的防護(hù)措施。醫(yī)院和檢驗科應(yīng)高度重視,定期加強教育,讓檢驗工作人員都意識到自我防護(hù)的重要性,自覺地養(yǎng)成良好的習(xí)慣。

（2）規(guī)范操作程序：各類醫(yī)療廢物、垃圾必須分類放置,及時消毒后,再由衛(wèi)生清潔人員取走。特別注意對損傷性醫(yī)療廢物的及時處理。嚴(yán)格防止感染或致病因子外泄而污染環(huán)境。要嚴(yán)格規(guī)章制度,養(yǎng)成良好的工作習(xí)慣。檢驗科應(yīng)制定一套有關(guān)衛(wèi)生防護(hù)的規(guī)章制度,人人都應(yīng)自覺遵守。如在實驗室內(nèi)禁止吸煙、吃東西、接聽手機;在免疫學(xué)檢驗室和細(xì)菌室工作,要戴口罩和手套。防止各種液體飛濺,必需避免手或皮膚直接接觸,若有意外污染應(yīng)及時消毒、沖洗并擦干飛濺出的液體。在離心機停止轉(zhuǎn)動前時,不要打開頂蓋,以減少氣溶膠的產(chǎn)生。更不要用手去使離心機減速,避免機械損傷的發(fā)生。

（3）避免銳器損傷,熟練掌握銳利器械的使用：感染性的各種針管、吸管、吸頭、試管、玻片等用后及時放在專用容器內(nèi);用過的針頭不要套回針帽,避免刺傷。銳器損傷后立即擠出傷口處的血液,用肥皂水和流水清洗傷口,2%碘伏消毒后紗布包扎,可套橡皮指套(或橡皮手套),下班前洗手再重新消毒包扎,并準(zhǔn)確記錄上報,確認(rèn)損傷器械是否來自有傳染性疾病的患者,以使受傷者及時得到監(jiān)測和治療。

（4）重視手部清潔：院內(nèi)感染病原體傳播最主要媒介是污染的手。戴醫(yī)用乳膠手套可以為醫(yī)務(wù)人員提供很好的保護(hù)。乳膠手套盡管不能避免針頭造成的機械損傷,但可以在很大程度上減少皮膚與血液的接觸。而且,當(dāng)針頭造成意外損傷后,乳膠手套還可以起到一種阻擋、封閉作用,減少進(jìn)入傷口的血量,從而降低感染。正確的洗手方法可使手表面的暫居菌減少1000倍,用普通肥皂和清水擦揉15s以上,可清除暫居菌或降低其在皮膚上的密度,搓洗15s,手表面的金黃色葡萄球菌可下降77%,洗2分鐘可降低85%;對銅綠假單胞菌效果更好,搓洗12s便可去除92%,洗2分鐘可去除97.8%。

（5）職業(yè)暴露的局部處理：工作中職業(yè)暴露后現(xiàn)場急救處理非常重要,若黏膜暴露應(yīng)用生理鹽水或清水反復(fù)沖洗干凈;皮膚意外接觸到血液等污染物,應(yīng)立即以肥皂和清水沖洗;若被血液污染的針頭或儀器等銳器刺傷,對傷口進(jìn)行輕輕擠壓,盡可能擠出損傷處的血液,用肥皂和流水清洗傷口,用70%酒精、0.2%-0.5%過氧乙酸、0.5%碘伏等浸泡或涂抹消毒,并包扎傷口、帶手套等,發(fā)生意外傷害暴露后要立即進(jìn)行傷口局部處理,并立即報告預(yù)防保健部門,受傷者及患者進(jìn)行HBV、HCV、HIV和梅毒等檢測。依據(jù)檢測結(jié)果盡快采取相應(yīng)的補救措施,減少職業(yè)感染率的發(fā)生。

二、實驗室風(fēng)險評估目的

風(fēng)險評估的目的就是確定實驗室防護(hù)等級，建立生物安全防護(hù)機制，配備適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)用品，采取相應(yīng)的防護(hù)措施 。

評估的范圍是科室所有涉及到的病原微生物，以及對化學(xué)、物理、輻射、電氣、水災(zāi)、火災(zāi)、自然災(zāi)害和噪音等進(jìn)行風(fēng)險評估?？剖夜芾頇C構(gòu)要統(tǒng)籌安排。

評估的結(jié)論要十分明確，包括危險程度極低的微生物。

可以根據(jù)實驗室工作特點、儀器使用，打包評估。

危害性評估始于實驗室設(shè)計建造之前，實施于實驗活動之中，在使用之后還需進(jìn)行定期的階段性再評估。

當(dāng)發(fā)生實驗室意外，或新發(fā)傳染病，或嚴(yán)重疫情時，應(yīng)特別注意要安排此項工作。

緊急、意外事故應(yīng)對方案提供以下操作規(guī)范：

1. 防備火災(zāi)、洪水、地震和爆炸等自然災(zāi)害

2. 意外暴露的處理和污染清除

3. 意外事故發(fā)生時的繼續(xù)操作、人員緊急撤離

4. 人員暴露和受傷的緊急醫(yī)療處理，如醫(yī)療監(jiān)護(hù)、臨床處理和流行病學(xué)調(diào)查。

三、風(fēng)險評估內(nèi)容

（一）生物因子危害評估

生物因子（biological agents）概念：可能引起感染、過敏或中毒的所有微小生物體，包括基因修飾的、細(xì)胞培養(yǎng)的和寄生于人體的。

（1）危害評估內(nèi)容包括生物因子已知或未知的特性，如生物因子的種類、來源、傳染性、傳播途徑、易感性、潛伏期、劑量-效應(yīng)關(guān)系、致病性、變異性、在環(huán)境中的穩(wěn)定性、與其他生物和環(huán)境的交互作用、流行病學(xué)資料、預(yù)防和治療方案等。

（2）制定評估報告：各種因素的風(fēng)險發(fā)生概率程度、針對這些風(fēng)險采取的預(yù)防措施以及風(fēng)險發(fā)生后的補救方法。

依據(jù)2006年1月11日中華人民共和國衛(wèi)生部頒布的《人間傳染的病原微生物名錄》，對醫(yī)院檢驗科可能接觸的病原體進(jìn)行評估。。

表1. 細(xì)菌、放線菌、衣原體、支原體、立克次體、螺旋體、病毒分類名錄

舉例：

1、金黃色葡萄球菌的生物危害評估報告

(一)金黃色葡萄球菌的傳播與致病

金黃色葡萄球菌在自然界中無處不在，在空氣、水、灰塵及人和動物的排泄物中都可找到。金黃色葡萄球菌的流行病學(xué)一般有如下特點：季節(jié)分布，多見于春夏季；中毒食品種類多，如奶、肉、蛋、魚及其制品。此外，剩飯、油煎蛋、糯米糕及涼粉等引起的中毒事件也有報道；上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率83%，所以人畜化膿性感染部位常成為污染源。

金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌，可引起局部化膿感染，也可引起菌血癥、肺炎、偽膜性腸炎、心包炎、骨髓炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。金黃色葡萄球菌的致病力強弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶此外，金黃色葡萄球菌還產(chǎn)生溶表皮素、明膠酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。

(二)金黃色葡萄球菌的生物學(xué)特性

典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8μm左右，顯微鏡下呈單個、成雙以及排列成葡萄串狀。無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜，革蘭氏染色陽性衰老、死亡和被白細(xì)胞吞噬后的菌體革蘭染色呈陰性。菌營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度35~37℃、最適pH7.4~7.6。

金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在10-15%NaCl肉湯中生長。可分解葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅反應(yīng)陽性，VP反應(yīng)弱陽性。許多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠。

金黃色葡萄球菌具有較強的抵抗力，對磺胺類藥物敏感性低，但對青霉素、紅霉素等高度敏感。

（三）金黃色葡萄球菌的檢測與診斷

1.標(biāo)本采集 采自不同感染部位的各種標(biāo)本，包括血液、腦脊液、穿刺液；痰液、膿液、創(chuàng)傷分泌物、尿液、糞便和嘔吐物等。

2.直接涂片鏡檢 直接涂片檢查在正常情況下呈無菌狀態(tài)的體液標(biāo)本如血液、腦脊液、穿刺液等，若有檢出革蘭氏陽性，顯微鏡下呈葡萄狀排列、無芽胞、莢膜，直徑0.5-1μm的球菌。即具有重要的臨床價值。

3.分離培養(yǎng) 可以選用普通營養(yǎng)瓊脂平板、血平板和高鹽甘露醇平板，血平板用葡萄糖肉湯增菌培養(yǎng)基。該菌在普通肉湯中呈均勻迅速混濁生長；若接種于瓊脂平板上35℃過夜后可形成直徑約2~3mm的厚菌落、濕潤有光澤、呈金黃色不透明圓形凸起。若接種于血平板，菌落周圍可形成明顯的透明的β—溶血環(huán)。在高甘露醇平板上金黃色葡萄球菌生成淡橙黃色菌落，以此可與其他凝固酶陰性的葡萄球菌相鑒別。

4.鑒別實驗

（1）血漿凝固酶試驗：血漿凝固酶分為結(jié)合型和游離型。前者結(jié)合在細(xì)菌的細(xì)胞壁上，能直接作用于血漿中的纖維蛋白原，使之轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，環(huán)繞菌體而形成凝塊。而游離型血漿凝固酶則在產(chǎn)生后被分泌到菌體外，不能直接作用于纖維蛋白原，但可以激活血漿凝血酶原，使之轉(zhuǎn)化成凝血酶，后者再作用于纖維蛋白原使其轉(zhuǎn)化為纖維蛋白。具體的測量方法也因此分為玻片法和試管法兩種。

（2）耐熱核酸酶試驗：將24小時肉湯培養(yǎng)物沸水浴處理15min，用接種環(huán)劃線刺種于甲苯胺蘭-DNA平板，35℃培養(yǎng)24小時，在刺種線周圍出現(xiàn)淡粉色者為陽性。本試驗金黃色葡萄球菌為陽性。

（3）甘露醇發(fā)酵實驗 金黃色葡萄球菌可發(fā)酵甘露醇。

（4）Staphaurex 膠乳凝集實驗 是鑒定金黃色葡萄球菌的一種快速、簡便的商品化直接凝集試驗。

5.生化鑒定 如上述，注意與其他凝固酶陽性的葡萄球菌的鑒別要點：PYR（吡咯烷酮-β-萘基酰胺）試驗陰性；VP試驗陽性；鳥氨酸脫羧酶試驗陰性。

6.免疫學(xué)方法 用酶聯(lián)免疫吸附試驗和對流免疫電泳方法可檢測金葡菌的磷壁酸抗體。

7.分子生物學(xué)方法 包括PFGE脈沖場凝膠電泳以及酶切圖譜分析等。

（四）金黃色葡萄球菌的防治及生物安全防護(hù)

1.細(xì)菌的防治

(1)金黃色葡萄球菌的控制主要包括：

1）防止金黃色葡萄球菌污染食品，防止帶菌人群對各種食物的污染。

2）防止金黃色葡萄球菌腸毒素的生成。

3）無菌措施(如檢查病人前后徹底洗手和消毒合用的器械)至關(guān)重要。無癥狀的鼻腔帶菌者,除非所帶菌株十分危險或被懷疑為暴發(fā)流行的傳染源,一般不必隔離。

治療包括膿腫引流,抗生素(重癥病人需腸外給藥)和全身支持療法。培養(yǎng)標(biāo)本應(yīng)在開始治療前或更換抗生素之前獲取。抗生素的選擇和劑量取決于感染的部位,疾病的嚴(yán)重程度和細(xì)菌對藥物的敏感性。

醫(yī)院獲得的葡萄球菌和大多數(shù)社區(qū)獲得的菌株,通常對青霉素G,氨芐青霉素和抗假單胞菌青霉素有耐藥性。大多數(shù)菌株對耐青霉素酶青霉素、頭孢菌素、亞胺培南類、慶大霉素、萬古霉素、替考拉寧、林可霉素和氯林可霉素敏感。

目前耐甲氧苯青霉素金黃色葡萄球菌(MRSA)菌株日益增多。MRSA菌株通常對耐β-內(nèi)酰胺酶青霉素,頭孢菌素和卡巴培南類有耐藥性。這些細(xì)菌對氨基糖苷類和大環(huán)內(nèi)酯類(紅霉素,克拉霉素,阿齊霉素,林可霉素和氯林可霉素)的耐藥性也很普遍。

雖然亞胺培南-西拉司丁或喹諾酮類對某些MRSA感染是有效的,但靜脈注射萬古霉素為首選。腎功能正常成人的通用劑量是每6小時靜脈注射500mg或每12小時靜滴注1000mg,至少在1小時內(nèi)滴完。腎功能受損時,劑量應(yīng)根據(jù)血清中藥物的濃度加以調(diào)整,療程視感染部位及病人的反應(yīng)而定,但一般為2~4周。某些嚴(yán)重的或有并發(fā)癥的感染,可能需要靜脈給藥治療6~8周,然后再口服治療1個月或更長時間。

可用于替代萬古霉素治療MRSA感染的藥物有：TMP-SMZ,成人劑量為TMP10~15mg /(kg.d)加SMZ50~75mg/(kg.d),分劑口服或腸外給藥,每次間隔8小時或12小時,連續(xù)2~4周；利福平(600mg/d)口服或腸外給藥；腸外給亞胺培南-西拉司丁(500mg每6小時1次)或美羅匹寧(0.5~1.0g每8小時1次。但利福平不要單獨應(yīng)用,因為細(xì)菌很易產(chǎn)生抗藥性。在治療異物相關(guān)性MRSA感染或漿膜腔MRSA感染時,利福平和氨基糖苷類是有用的輔助藥物。鄰氯青霉素,雙氯青霉素,TMP-SMZ,環(huán)丙沙星及局部用莫匹羅星(mupirocin)可用于治療MRSA帶菌狀態(tài),但MRSA對這些藥物可產(chǎn)生抗藥性?？谷f古霉素的腸球菌(VRE)菌株的流行日益增加,這種菌株在實驗室中可將引起抗萬古霉素的基因轉(zhuǎn)為凝固酶陽性的金黃色葡萄球菌菌株,而在感染的病人中則轉(zhuǎn)變?yōu)槟堂戈幮云咸亚蚓蛛x株?？墒沁@些葡萄球菌很容易對治療這類感染的其他藥物產(chǎn)生抗藥性。桿菌肽,若有的話,可試用于治療抗萬古霉素的葡萄球菌感染。對這些病人應(yīng)嚴(yán)格隔離,以防他們的細(xì)菌傳播。

2.細(xì)菌的生物安全防護(hù)

根據(jù)《病原微生物生物實驗室生物安全管理條例》中的有關(guān)規(guī)定，人間傳播的微生物名錄（待頒布）金黃色葡萄球菌屬于三類，BSL-2。相關(guān)的防護(hù)事宜包括：

(1)操作要求

1)實驗時，未經(jīng)實驗室主任同意，限制或禁止進(jìn)入實驗室。

2)不許在工作區(qū)域飲食、吸煙、清洗隱型眼鏡和化妝。食物應(yīng)存放在工作區(qū)域以外專用櫥柜或冰箱中。

3)所有的操作過程應(yīng)盡量細(xì)心，避免產(chǎn)生和濺出氣溶膠。

4)對于污染的銳器，必須時刻保持高度的警惕，包括針、注射器、玻片、加樣器等。

5)注射和吸取感染材料時，只能使用針頭固定注射器或一次性注射器（即注射器和針頭是一體的）。用過的一次性針頭必須彎曲、切斷、破碎、重新套上針頭套、從一次性注射器上去掉，或在丟棄前進(jìn)行人工處理，要不將之小心放入不會被刺穿的、用于收集廢棄銳器的容器中。非一次性銳器必須放置在堅壁容器中，轉(zhuǎn)移至處理區(qū)消毒，最好高壓殺菌。

6)打碎的器皿不能直接用手處理，必須用其它工具處理，如刷子和簸箕、夾子或鑷子。盛污染的針頭、銳器、碎玻璃的容器在倒掉前，應(yīng)按照相關(guān)的規(guī)定進(jìn)行消毒。

7)所有的培養(yǎng)物、儲存物及其它規(guī)定的廢物在釋放前，均應(yīng)使用可行的消毒方法進(jìn)行消毒，如高壓滅菌。轉(zhuǎn)移到就近實驗室消毒的物料應(yīng)置于耐用、防漏容器內(nèi)，密封運出實驗室。離開該系統(tǒng)進(jìn)行消毒的物料，在轉(zhuǎn)移前應(yīng)包裝，其包裝應(yīng)符合有關(guān)的法規(guī)。

8)濺出或偶然事件中，明顯暴露于傳染源時，要立即向?qū)嶒炇抑魅螆蟾?。進(jìn)行適當(dāng)?shù)尼t(yī)學(xué)評估、觀察、治療，保留書面記錄。

9)按日常程序、在有關(guān)傳染源的工作結(jié)束后、尤其是傳染源濺出或灑出后、或受到其他傳染源污染后，實驗室設(shè)備和工作臺面應(yīng)當(dāng)使用有效的消毒劑消毒。污染的設(shè)備在送去修理、維護(hù)前，要按照相關(guān)的規(guī)定消毒；在離開設(shè)施轉(zhuǎn)移前，要按照相關(guān)的規(guī)定打包運輸。

(2)安全設(shè)備

1）正確使用和保養(yǎng)生物安全柜、最好是二級生物安全柜、或其他合適的人員防護(hù)設(shè)施、或物理遏制裝置。

2）確定可能形成傳染性氣溶膠或濺出物的實驗過程，包括離心、研磨、勻漿、劇烈震蕩或混勻、超聲波破裂、開啟裝有傳染源的容器、采集感染標(biāo)本等。

3）涉及高濃度或大體積的傳染源時，若選用密封轉(zhuǎn)頭或帶安全罩的離心機，若轉(zhuǎn)頭或安全罩僅在生物安全柜中打開，則可在開放實驗室內(nèi)離心。

4）當(dāng)必須在生物安全柜外處理標(biāo)本時，需采取面部保護(hù)措施（跟鏡、口罩、面罩、或其他防濺裝置），以免傳染源或其他有害物濺或灑到面上。

5）在實驗室內(nèi)，必須使用專用的防護(hù)性外衣、大褂、罩衫或制服。人員到非實驗室區(qū)域時，防護(hù)服必須留在實驗室內(nèi)。防護(hù)服可以在實驗室內(nèi)處理，也可以在洗衣房中洗滌，但不能帶回家中。

6）可能接觸潛在傳染源、被污染的表面或設(shè)備時，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能重復(fù)使用，不能用于接觸“潔凈”的表面（鍵盤、電話等），也不應(yīng)當(dāng)戴著到實驗室外。要備有帶滑石粉的乳膠手套。脫掉手套后，要洗手。

（二）實驗室工作崗位風(fēng)險評估

例：1.標(biāo)本運送崗位

2.免疫（HIV）檢測崗位