本標(biāo)準(zhǔn)適用于生產(chǎn)和使用磷胺的各類企業(yè)。
　　1　衛(wèi)生要求
　　車間空氣中磷胺最高允許濃度為0.02mg/m³(皮)。
　　2 監(jiān)測檢驗方法
　　本標(biāo)準(zhǔn)的監(jiān)測檢驗方法采用酶化學(xué)法，見附錄A。

　　附錄A
　　酶化學(xué)法(補充件)
　　A.1　原理
　　磷胺對膽堿酯酶有抑制作用，而膽堿酯酶能促進乙酰膽堿的水解，乙酰膽堿的量可用氯化鐵比色法定量測定，由此換算成磷胺的含量。
　　本法的檢出下限為0.1μg/mL。
　　A.2　儀器
　　a. 多孔玻璃板吸收管。
　　b. 恒溫水浴箱：37±0.5℃。
　　c. 秒表。
　　d. 分光光度計。
　　e. 個體采樣器。
　　A.3　試劑
　　A.3.1　吸收液：蒸餾水。
　　A.3.2 緩沖液(pH=7.2)：將16.72g磷酸氫二鈉(Na₂HPO₄·12H₂O)及2.72g磷酸二氫鉀(KH₂PO₄)溶于1L水中。
　　A.3.3　氯化乙酰膽堿溶液：稱0.1000g氯化乙酰膽堿，溶于100mL緩沖液(pH=7.2)，保存于冰箱內(nèi)。
　　A.3.4　堿性羥胺溶液：臨用前將下列溶液(1)及(2)等體積混合。
　　溶液(1)：13.9%鹽酸羥胺溶液，保存于冰箱內(nèi)。
　　溶液(2)：14%氫氧化鈉溶液。
　　A.3.5　三氯乙酸溶液：10g三氯乙酸溶于100mL1∶2鹽酸中。
　　A.3.6　10%氯化鐵溶液：將10g氯化鐵(FeCl₃·6H₂O)加到0.84mL鹽酸及少量水中，微熱使溶解，然后加水至100mL。
　　A.3.7　標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取磷胺的純品，溶于甲醇中，配成1mL含100mg磷胺的貯備液，保存于冰箱中，臨用時取適量貯備液用吸收液稀釋配成1mL含2μg磷胺。
　　A.3.8　膽堿酯酶溶液：以健康馬血清為酶原，用緩沖液稀釋成酶活力為70％－80％(見酶活力測定)，保存于冰箱中。
　　酶活力測定：取3mL健康馬血清置于25mL容量瓶中，用緩沖液稀釋至刻度，以此馬血清溶液按表A1配制酶活力標(biāo)準(zhǔn)管。各管分別加1mL水，置于37℃恒溫水浴箱預(yù)熱10min，然后向每管各加入1.0mL氯化乙酰膽堿溶液(每隔30s加一管)，準(zhǔn)確地在37℃下反應(yīng)30min，30min末，加入2mL堿性羥胺溶液(每隔30s加一管)，按順序從水浴中取出強烈振搖4min，然后向各管加入1mL三氯乙酸溶液，搖勻后，加入1mL氯化鐵溶液，振搖過濾，濾液在波長為520nm下測其吸光度，以水作參比液。用公式(B-X)/B×100(%)(式中B為零管的吸光度，X為各管的吸光度)，得到氯化乙酰膽堿在37℃被酶水解30min的水解百分數(shù)，取水解百分數(shù)為70-80%的馬血清作標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)馬血清含量(25mL中含純馬血清毫升數(shù))配制膽堿酯酶溶液。
　　表A1　酶活力標(biāo)準(zhǔn)管的配制
　　

　　A.4　采樣
　　取盛有5ml吸收液的多孔玻璃板吸收管做采樣管，以0.5L/min的速度抽取10L空氣。
　　A.5　分析步驟
　　用吸收管中吸收液洗滌進氣管內(nèi)壁3次，然后倒入10mL具塞比色管中，取1.0mL樣品溶液置于25mL具塞比色管中，同時按表A2配制標(biāo)準(zhǔn)管。
　　表A2　磷胺標(biāo)準(zhǔn)管的配制
　　
　　B管加1mL緩沖液，樣品管和標(biāo)準(zhǔn)管(包括B管)放在37℃恒溫水浴箱中預(yù)熱10min，然后各管(除B管外)加入1.0mL膽堿酯酶溶液，每隔30s加一管，在恒溫水浴箱中準(zhǔn)確反應(yīng)30min再向各管加入1.0mL氯化乙酰膽堿溶液(每隔30s加一管)，反應(yīng)30min后(不時搖動)，每管加入2mL堿性羥胺溶液(每隔30s加一管)，按順序從水浴中取出后強烈振搖4min，然后向各管中加入1mL三氯乙酸溶液，搖勻，加入1mL氯化鐵溶液，振搖過濾，濾液在波長520nm下測其吸光度，并以水作空白參比液，將所得吸光度按下式計算出膽堿酯酶被磷胺抑制的百分數(shù)(或稱百分抑制率)。
　　膽堿酯酶百分抑制率(%)=[1-(B-X)/(B-C)]×100
　　=(X-C)/(B-X)×100 ………………(A1)
　　式中：B、C——對照管B和C管的吸光度；
　　X——樣品管的吸光度。
　　用磷胺含量對相應(yīng)的膽堿酯酶百分抑制率繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算出樣品的百分抑制率，再由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出磷胺含量。
　　X=5C/V₀ ………………(A2)
　　式中：X——空氣中磷胺的濃度，mg/m³；
　　C——所取樣品溶液中磷胺的含量，μg；
　　V₀——換算成標(biāo)準(zhǔn)狀況下的采樣體積，L。
　　A.6　注意事項
　　A.6.1　每一批馬血清，須測定其活力，如血清在冰箱中保存時間超過一個月，必須重新測酶活力。
　　A.6.2　磷胺標(biāo)準(zhǔn)液只能當(dāng)日稀釋，當(dāng)日使用，放置24h后就會有部分水解，使?jié)舛冉档停滑F(xiàn)場采得樣品，應(yīng)避光保存，并須在24h內(nèi)進行分析。

　　附加說明：
　　本標(biāo)準(zhǔn)由全國衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)委員會勞動衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)分委會提出。
　　本標(biāo)準(zhǔn)由上海市衛(wèi)生防疫站負責(zé)起草。
　　本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人陳因久、楊士興、莊建國、殳家豪。
　　本標(biāo)準(zhǔn)由衛(wèi)生部委托技術(shù)歸口單位中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院勞動衛(wèi)生與職業(yè)病研究所負責(zé)解釋。